DNA/RNA合成仪使用方法

　　DNA/RNA合成仪(以DNA为例)的使用方法涵盖试剂准备、序列输入、参数设置、合成柱检查、管路清洗、合成过程监控及产物处理等多个环节，以下是详细介绍：
 

　　试剂准备：
 

　　仔细检查合成仪上所有试剂瓶中的试剂量，必要时换掉试剂瓶，特别注意乙腈等用量较大的溶剂。
 

　　确保试剂瓶组和碱基瓶组密封良好，保持一定压力，防止外界空气进入影响合成效果。
 

　　序列输入：
 

　　将要合成的DNA序列输入合成仪，可通过计算机辅助设计软件完成，考虑密码子偏好性、二级结构和限制酶位点等因素。
 

　　检查选择的合成步骤是否正确，确保合成过程按照预设的流程进行。
 

　　参数设置：
 

　　选择结束方法，仪器的原始状态通常为TritylOffAuto，若打算以5'-DMT基团连接纯化寡核苷酸，则将其转变为TritylOnAuto结束状态。
 

　　在每个柱监视器的Username下，输入所希望的保存名字，方便后续管理和追踪。
 

　　以代码代替相应的DNA序列标记每一个收集瓶，便于识别和分类。
 

　　合成柱检查：
 

　　运行StartColumn步骤检查每一个柱的位置，确保合成仪上合成柱处于正确的位置，避免因位置偏差导致合成失败。
 

　　检查连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)是否充满，防止因废液瓶过满导致液体溢出，影响合成环境。
 

　　管路清洗：
 

　　如果分部收集器用来收集每个DMT脱保护步骤的流出物，确保试管充分清洁干净，并打开分部收集器，确保DMT废液管路通向分部收集器。
 

　　启动循环，运行开始程序清洗试剂管路，除去原来的试剂，防止旧试剂对新合成反应产生干扰。
 

　　合成过程监控：
 

　　合成过程中，可通过电导流动池测定每个DNA合成循环内释放的DMT阳离子的总电导，监控合成反应的进行情况。
 

　　定期检查合成仪的运行状态，确保各项参数(如温度、压力、时间等)在正常范围内。
 

　　DNA/RNA合成仪合成完成与产物处理：

 

　　合成完成后，取出载体进行切割并且脱保护，一般40bp以内的DNA片段至少需要2小时，链越长需要时间越长。
 

　　采用适当的纯化方式(如OPC纯化、PAGE纯化、脱盐纯化、HPLC纯化等)去除短片段和盐离子，提高产物纯度。
 

　　对纯化后的DNA进行测序验证，确保其序列与预期相符。