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多肽合成仪的运行原理

发布时间:2023-01-04      点击次数:111
多肽固相合成法是多肽合成化学的一个重大的突破,其最大特点是不必纯化中间产物,合成过程能够连续进行,从而为多肽合成的自动化奠定了基础。
 
多肽合成仪能够用于合成各种蛋白质与多肽,进行蛋白质结构、功能以及体外相互作用、免疫学等方面的研究,包括合成汉坦病毒核衣壳蛋白抗原多肽片段以及多肽类药物的研制。
 
运行原理:
 
多肽合成仪以固相合成为反应原理,在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序(序列,一般从C端-羧基端 向 N端-氨基端)不断添加、反应、合成,操作最终得到多肽载体。固相合成法,大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生,参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的,并且在反应之前必须活化。固相合成方法有两种,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多优势,现在大多采用Fmoc法合成,但对于某些短肽,tBoc因其产率高的优势仍然被很多企业所采用。
具体合成由下列几个循环组成:
1)去保护:Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂(piperidine)去 除氨基的保护基团。
2)激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联,形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环:这两步反应反复循环直到合成完成。
3)洗脱和脱保护:多肽从柱上洗脱下来,其保护基团被一种脱保护剂(TFA) 洗脱和脱保护。
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